馬耳他之圍(馬耳他語: L-Assedju l-Kbir) 發生於1565年,這一年奧斯曼帝國入侵馬耳他島,受到醫院騎士團的抵抗。醫院騎士團的騎士、在西班牙帝國援軍和當地平民的協助下取得了這場圍城戰的勝利。這是歷史上最為血腥和激烈的圍城戰之一,亦是十六世紀歐洲最值得稱道的事件之一。伏爾泰也說過:「沒有什麼比馬耳他之圍更有名了。」馬耳他之圍打破了歐洲人心中鄂圖曼帝國不敗的神話,並標誌着西班牙在地中海的霸權時代的開始。這場圍城戰是西方基督教聯盟和奧斯曼帝國地中海爭霸的高峰,這場爭霸包括此前1551年鄂圖曼海軍將領德拉古特對馬爾他的攻擊和1560年基督教聯盟海軍在傑爾巴島戰役的慘敗,以及之後1571年決定性的勒班陀戰役。