马耳他之围(马耳他语: L-Assedju l-Kbir) 发生于1565年,这一年奥斯曼帝国入侵马耳他岛,受到医院骑士团的抵抗。医院骑士团的骑士、在西班牙帝国援军和当地平民的协助下取得了这场围城战的胜利。这是历史上最为血腥和激烈的围城战之一,亦是十六世纪欧洲最值得称道的事件之一。伏尔泰也说过:“没有什么比马耳他之围更有名了。”马耳他之围打破了欧洲人心中鄂图曼帝国不败的神话,并标志着西班牙在地中海的霸权时代的开始。这场围城战是西方基督教联盟和奥斯曼帝国地中海争霸的高峰,这场争霸包括此前1551年鄂图曼海军将领德拉古特对马尔他的攻击和1560年基督教联盟海军在杰尔巴岛战役的惨败,以及之后1571年决定性的勒班陀战役。